二硫键定位分析
蛋白理论分子量为M1,有n各半胱氨酸：
1 直接测定蛋白的分子量,得到Mw－2x,然后用DTT将全部二硫键打开得到M1
x即为该蛋白含有的二硫键的个数
2 将蛋白利用4－VP处理得到分子量MW＋105y,y即为该蛋白含有的游离半胱氨酸个数,x＋y＝n
3 将该蛋白利用合适的酶进行酶切（trypsin,chymotrypsin...）,联用分析
得到肽谱,计算理论上出现的肽段以及实际得到的肽断.
4 将酶解得到的多肽混合物用DTT将全部二硫键打开,联用分析,与3得到的肽断混合物比对,计算出现的新肽断,则二硫键位于新出现的肽断之间
5 如果一个肽断上有两个cys,则需要先利用4－vp处理蛋白,然后酶解,DTT还原,将目标肽断进行MS3分析,即得到同一肽断上那各cys以二硫键的形式存在
6 如果两个disulfide交叉,则需要利用分部还原,多用TCEP.
7 常用还原二硫键的试剂DTT,TCEP,常用还原衍生Cys上的巯基的试剂4－vp等.