按你的实验体系来看你的mix是2×的吧,同时你的引物应该是5uM左右的吧?
重复你的实验,但做如下改进：
1,挑菌进500ul的ddH2O,充分混匀,不需煮,取1ul做模板,你之前直接挑菌,模板有可能过多,也会p不出带；（也可以先把克隆挑到1-5ml的LB中摇菌1小时,直接取1ul来做模板）
2,设阴性对照以及阳性对照（用有目的片段的质粒或菌为模板）,如果阳性对照能出来,而你还没p出来,就说明你的菌里没目的片段.
3,你的片段为1.3kb,如果你用的是普通taq的mix,那么你的延伸要设90s或100s才够,退火温度将梯度设在52-60℃.酶离子就别多加了.
此外,检查你的平板是不是太长时间了,抗生素失效?会造成质粒丢失,自然p不出来.