如下:
1)获取目的基因的方法,一是(从基因文库获取);二是(PCR扩增).
2)如何使目的基因和质粒结合形成重组质粒?
(用同种限制酶对目的基因和质粒进行酶切,然后用DNA连接酶进行连接).
3)目前把重组质粒导入细菌时,效率还不高,有的只导入普通质粒A,只有极少数导入的是重组质粒,而大部分根本没有导入质粒.此处可通过如下步骤鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒:将得到的细菌涂抹在一个含氨苄青霉素培养基上,能够生长的就导入了,反之则没有.使用这种方法鉴别的原因是(重组DNA质粒中的氨苄青霉素抗性基因表达,可以抵抗青霉素).
(4)若把已导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含四环素的培养基上培养,将会发生(含有普通质粒的细菌正常存活,含有重组质粒的细菌死亡)现象,原因是(普通质粒含有四环素抗性基因,可以表达;重组质粒四环素抗性基因遭到破坏,被切断,无法表达).