解题思路：分析题图：图示为DNA分子片段的局部结构示意图，其中a为磷酸二酯键，是限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶的作用位点；b为氢键，是解旋酶的作用位点．
A、a为磷酸二酯键，可被限制性核酸内切酶切断，A正确；
B、a为磷酸二酯键，可被DNA连接酶连接起来，B正确；
C、b为氢键，可被解旋酶断裂，C正确；
D、b为氢键，而限制性核酸内切酶切断的是磷酸二酯键，D错误．
故选：D．
点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．
考点点评： 本题结合DNA分子片段的部分结构示意图，考查DNA分子结构的主要特点、基因工程等知识，要求考生识记DNA分子结构的主要特点，能准确判断图中各结构的名称；识记基因工程的工具酶及其作用位点，能结合所学的知识准确判断各选项．