扩增片断一般是80-200吧.
你的其他问题最好再细化下,看不太懂.
比如你做荧光定量PCR,用的是探针的方法,还是引物的方法?原理都是不同的.你在上游插入一段基因的目的是什么?要分析的是你的基因还是你插入的序列?