洗是用浸泡的.背景颜色深不一定是洗得不干净.原因有几点：1）材料自身荧光；2）一抗,二抗的浓度,时间；3）激光共聚焦显微镜的问题,我是指显微镜的好坏,confogo(好像是这样拼写的- -）的显微镜就可以滤去背景荧光.
你说的抗体我没用过,我做过的免疫组化是用的拟南芥和贯叶连翘的愈伤组织,自身激发荧光很强,一抗是58K和Pin1,浓度都是1：250稀释的,二抗是FITC和Cy3,1：50和1:250.一抗4度过夜,二抗2小时.我做的是双标,二抗后先BSA洗1遍,再PBS 3遍.背景每次都还好,对照组的背景也不强.