黄色反应 (Xanthoproteic reaction)?
原理?
凡是含有苯环的化合物都能与浓硝酸作用产生黄色的硝基苯衍生物.该化合物在碱性溶液中进一步转化成深橙色的硝醌酸钠 .
在蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基易发生上述反应,而苯丙氨酸不易硝化,需加少量浓硫酸催化才能呈明显的正反应.皮肤、指甲、头发等遇浓硝酸变黄即为这一反应的结果.
操作步骤?
一、取一支试管加 4滴0.5%苯酚溶液,再加浓硝酸2滴,观察黄色出现,冷却后逐滴加入10%氢氧化钠溶液,观察颜色转变为橙色.
二、取一支试管加蛋白质溶液 4滴及浓硝酸2滴,由于强酸的作用,开始蛋白质形成白色沉淀,小火加热,则沉淀变为黄色,冷却之,逐滴加入10%氢氧化钠溶液,颜色由黄色转变成深橙黄色.
三、剪少许指甲或头发放入试管中,加入数滴浓硝酸,观察颜色变化.
此外,蛋白质的显色反应
常用的显色反应
双缩脲反应：
该反应是肽键常用的反应,即在碱性铜溶液中,
肽键与铜离子形成络合物,呈紫色(在540nm有最大
光吸收峰).
酚试剂法：
该反应是比色法测定蛋白质的常用方法,即蛋白
质以碱性铜溶液处理后,加用酚试剂,呈蓝色(在650nm
有最大光吸收峰).
考马斯亮蓝法：
即蛋白质与一种蛋白质染料考马斯亮蓝G250反应形成
复合物,该复合物在595nm有最大光吸收峰.1