1、涂片的制作有一定要求,即涂片不能太厚,细菌在涂片中应呈单层分布.2、为了观察细菌的典型形态,应取处于对数生长期的细菌进行涂片.
步骤及注意事项：
1．涂片：取清洁无油玻片一块,置火焰上通过数次,用烧灼并冷却了的接种环取菌液1～2环,均匀涂布于载玻片中央（直径1～1.5 cm）.
玻片无菌,接种环烧灼并冷却后使用,涂布应均匀.
2．干燥：涂片放室温自然干燥；也可将标本面向上,在离火焰约15 cm高处微微加热烘干,切勿靠近火焰；或用电吹风吹干.
3．固定：常用加热固定法,其主要目的之一是使菌体较牢固粘附于载玻片,防止其在染色时被染液和水冲掉,其二是杀死细菌；其三是使菌体蛋白质变性凝固,从而使细菌形态固定.其四是可改变菌体对染料的通透性,从而使细菌易于着色.固定的方法是手执载玻片一端,标本面向上,在火焰外焰上水平地以钟摆速度来回通过3次,注意温度不宜太高,以玻片反面触及手背部皮肤感觉热而不烫为宜.
注：
若取菌落涂片,则需先用接种环取0.9% 氯化纳（NaCl）1～2环置载玻片上,再用烧灼且已冷却的接种环取菌落少许放在0.9% NaCl内研磨均匀,涂成直径约1～1.5 cm的菌膜.接种环经火焰灭菌后方可放回原处.其它步骤同上2,3